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      本試劑盒通過特別優(yōu)化的裂解緩沖液，釋放組織/細胞/血液中的基因組DNA，再通過超順磁性磁珠在結(jié)合液的作用下選擇性吸附裂解液中的基因組DNA，經(jīng)過漂洗液的清洗除去磁珠吸附的少量雜質(zhì)，在洗脫液的作用下釋放吸附的基因組DNA，即獲得高質(zhì)量基因組DNA。本產(chǎn)品適用于動物組織、培養(yǎng)細胞以及全血基因組DNA提取?？蓮?-30 mg動物組織、10⁶-10⁷新鮮培養(yǎng)的細胞懸液以及5-100 μL無核或有核紅細胞全血（含抗凝劑）中快速提取高純度完整的基因組DNA，獲得的基因組DNA可直接用于后續(xù)PCR模板、酶切、雜交等分子生物學(xué)實驗。

儲存與運輸

      Proteinase K和RNase A冰袋（wet ice）運輸，-20℃保存；其余試劑室溫運輸，室溫儲存；有效期12個月。

使用前準備

1. 自備磁力架、無水乙醇。

2. Buffer GA如有沉淀現(xiàn)象，請于65℃加熱溶解，待恢復(fù)至室溫后使用。

3. 使用前請向Buffer PD加入18 mL的無水乙醇，向Buffer PW中加入56 mL的無水乙醇。

實驗步驟

1. 樣本處理：

a. 取新鮮或超低溫凍存的動物組織2-30 mg，置于裝有2-3顆3 mm研磨珠（推薦ABC0221-150G）的1.5 mL離心管或?qū)Ｓ醚心ス苤?，加?00 μL Buffer GA，使用組織研磨儀（推薦ABC901001）在常溫條件下將組織徹底研磨至勻漿狀（如果組織沒有被徹底勻漿，將會影響DNA的得率和質(zhì)量）；

b. 取10⁶-10⁷細胞懸液，置于1.5 mL離心管中，1,000 rpm離心5 min，使用移液器輕輕吸棄上清。向離心管中加入200 μL Buffer GA，使用渦旋振蕩器渦旋混勻；

c. 取50-100 μL無核紅細胞全血（含抗凝劑）于1.5 mL離心管中，補加Buffer GA至200 μL，使用渦旋振蕩器渦旋混勻（如果處理更大體積的血液，在樣本中加入3倍體積紅細胞裂解液（推薦ABC2033）顛倒混勻，室溫放置5 min，期間顛倒混勻2-3次，3000 rpm離心10 min，使用移液器輕輕吸棄上清，請勿吸取白細胞沉淀，加入200 μL Buffer GA，使用使用移液器吹打混勻）；

d. 取5-20 μL有核紅細胞全血（含抗凝劑），置于1.5 mL離心管中，補加Buffer GA至200 μL，使用使用移液器吹打混勻；

2. 加入20 μL Proteinase K和4 μL RNase A，56℃孵育30 min（每10 min混勻一次，可加速組織裂解），較難裂解的材料可以適當延長裂解時間；

3. 1,2000 rpm離心2 min，將組織上清液轉(zhuǎn)移至Nuclease-free離心管中，盡量避免吸取沉淀（提取細胞/血液樣本基因組時，請忽略此步驟）；

4. 向離心管中加入200 μL Buffer GB，顛倒混勻，70℃放置10 min；

5. 向離心管中加入200 μL無水乙醇，顛倒混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，12,000 rpm離心2 min，將上清液轉(zhuǎn)移至Nuclease-free離心管中，盡量避免吸取沉淀；

6. 向裝有上清液的離心管中加入20 μL SweMag Beads（SweMag Beads使用前需充分振蕩至分散均勻），使用移液器吹打至磁珠分散均勻；

7. 室溫靜置10 min，放置過程中，使用移液器吹打混勻2-3次，保持磁珠處于懸浮狀態(tài)；

8. 將離心管移至磁力架上靜置30 s，待上清清澈后，吸棄上清；

9. 加入500 μL Buffer PD，移開磁力架，使用移液器吹打至磁珠分散均勻，將離心管移至磁力架上靜置30 s，待上清清澈后，吸棄上清；

10. 加入600 μL Buffer PW，移開磁力架，使用移液器吹打至磁珠分散均勻，將離心管移至磁力架上靜置30 s，待上清清澈后，吸棄上清；

11. 重復(fù)步驟10；

12. 將離心管蓋打開，室溫放置5-10 min，使乙醇完全揮發(fā)（避免磁珠過度干燥，以免影響核酸得率）；

13. 移去磁力架，向離心管中加入50-100 μL Buffer TE或Nuclease-free Water，使用移液器輕輕吹打至磁珠分散均勻，室溫靜置5 min；

14. 將離心管置于磁力架上，直至磁珠完全吸附，吸取上清至一新的Nuclease-free 1.5 mL離心管中，即得高純度的DNA。

注意事項

1. 操作之前，請務(wù)必認真閱讀本產(chǎn)品說明書。

2. 應(yīng)盡量使用新鮮的實驗材料，以確保提取的基因組DNA不被降解。

3. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會導(dǎo)致提取的DNA產(chǎn)量下降。

4. 組織材料切勿超過最大起始量，且要充分裂解，否則可能影響得率。

5. 磁珠懸液在保存過程中應(yīng)避免冷凍；磁珠易沉降，使用前應(yīng)充分振蕩使其保持均勻懸浮狀態(tài)。

6. 向樣本中加入磁珠前，需要將樣本中的試劑混合均勻。

7. 請勿長時間干燥磁珠，以免影響DNA洗脫效率。